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2×pfu PCR MasterMix 不含染料

2×pfu PCR MasterMix 不含染料

產品編號:RTH3103-02

產品規(guī)格:500μl

相關規(guī)格:
數(shù)量
價格 ¥100

2×pfu PCR MasterMix

 產品包裝:

 

 

目錄號

包裝

2×pfu PCR MasterMix(不含染料)

RTH3103-02

500μl

RTH3103-03

5×500μl

2×pfu PCR MasterMix(含染料)

RTH3104-02

500μl

RTH3104-03

5×500μl

注:以50μl PCR反應體系為例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20 50μl PCR反應。

 儲存條件: -20℃可長期保存;4℃穩(wěn)定貯存3個月。經常使用時,一旦融化后請4℃貯存,盡量避免反復凍融。

 產品簡介:

本產品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反應緩沖液、PCR反應的增強劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,濃度為2×。使用時,只需補加實驗所需的引物和模板后即可進行PCR反應,可最大限度的減少人為誤差,具有快速簡便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。用于高保真的DNA片段的擴增。使用該產品得到的PCR擴增產物為平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通過平滑末端克隆法進行克隆。

 質量控制:

以λ DNA為模板,可以很好擴增5kb的DNA片段;以水稻基因組為模板,可以很好擴增3.2kb的DNA片段。

●  使用說明:

1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻后Minispin將溶液收集到管底。

2. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應體系:

 

50μl反應體系

終濃度

2×MasterMix

25μl

上游引物 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

下游引物 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

模板

× μl

10pg-1μg

補至50μl

 

3. 快甩離心將反應液收集到管底。

4. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物油。

5. PCR儀上執(zhí)行以下程序:

步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

初始變性

94

5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

0.5kb/min

最后延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應條件視模板、引物等的結構條件不同而各異。在實際操作中需根據模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,設定最佳的反應條件(溫度、時間等)。

6. 電泳檢測。

 注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上樣;不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合后上樣。



1% agarose gel,RealSafe Red stain
lane 1: 1800bp,Rice fragement
lane 2: 1000bp, plasmid fragement
lane 3: 500bp, plasmid fragement


 
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