快速蛋白銅染試劑盒
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產(chǎn)品編號
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規(guī)格
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運輸
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RTD6207
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10 T
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RT
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● 產(chǎn)品簡介：
本試劑采用以銅離子為基礎(chǔ)的負(fù)染色方法，用于SDS-PAGE或Native-PAGE電泳凝膠染色，不需要使用含有刺激性的甲醛和冰醋酸，實驗方便快速，可以在30 min左右完成，最低能夠檢測出2 ng的蛋白條帶，該方法不對蛋白質(zhì)產(chǎn)生修飾作用，而且經(jīng)過脫色液處理后，可以用于電洗脫或采用PAGE膠蛋白微量回收試劑盒（貨號：RTD8108）進行膠回收，以便進行質(zhì)譜和測序分析等，也可以用于電轉(zhuǎn)移或用其他染色方法（銀染或考染）對膠重新染色。
按照每次使用50 ml1×即用型染色液計算，本產(chǎn)品可以染色 8-10塊mini-PAGE（8×10cm）膠。
● 產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貯存
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運輸
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RTD6207-01
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增強液（4×）
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100
ml
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4-8℃
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RT
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RTD6207-02
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染色液（10×）
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60
ml
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4-8℃
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RT
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RTD6207-03
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脫色液（10×）
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100
ml
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4-8℃
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RT
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說明書
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1份
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-
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-
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● 儲存條件
按照標(biāo)簽溫度貯存，常溫運輸。開封后一年有效。
● 凝膠染色的操作步驟：
以下步驟以一塊1 mm厚度8×10cm的凝膠操作為例。
一. 漂洗：
取出電泳后的 PAGE 凝膠，用超純水漂洗兩次，每次1分鐘。
二. 前處理：
2.1 準(zhǔn)備工作：將增強液（4×）用超純水稀釋4倍，配成1×增強液。
2.2 凝膠中加入50 ml 1×增強液，常溫?fù)u床慢搖10分鐘。
三. 漂洗：
棄增強液，用超純水漂洗凝膠兩次，每次10-20秒，至泡沫完全清除干凈。
注：漂洗時間不要太長，否則會導(dǎo)致染色效果下降。
四. 染色：
4.1 準(zhǔn)備工作：將染色液（10×）用超純水稀釋10倍，配成1×即用型染色液。
注：染色液略成半渾濁狀態(tài)。
4.2凝膠中加入 50 ml 1×即用型染色液，搖床慢搖5-10分鐘，觀察結(jié)果：在黑色背景下，可見光觀察，蛋白條帶為棕褐色，無蛋白區(qū)域為藍(lán)綠色；可見光燈箱觀察（凝膠底部打光），蛋白質(zhì)條帶反顯白色，無蛋白的膠區(qū)則為黃綠色。
五. 漂洗：
棄染色液，超純水洗滌凝膠2次，每次搖床慢搖1分鐘。
注：凝膠可以在水中保存1-2周。
六. 脫色：
6.1 準(zhǔn)備工作：將脫色液（10×）用超純水稀釋10倍，配成1×即用型脫色液。
6.2 如需要進行蛋白切膠回收，將所需的蛋白質(zhì)條帶切下，用超純水漂洗切下的凝膠一次；如凝膠需要考染，銀染或轉(zhuǎn)膜實驗，直接用超純水漂洗整個凝膠一次。
6.3 棄水，凝膠中加入適量1×即用型脫色液覆蓋凝膠，搖床慢搖5分鐘，倒掉脫色液；
6.4 重復(fù)脫色步驟2次。脫色完全的標(biāo)志是白色凝膠完全脫色為無色透明。
6.5 超純水漂洗凝膠兩次，進行后續(xù)實驗操作。
實驗示例：
4-20% RealPAGE Precast Gel
lane
1-5: BSA分別為1，2，3，4，5μg
M：RTD6149 10-250kD
lane
6: Bacterial Lysis
凝膠顯影后(脫色前)蛋白條帶在黑色背景下為藍(lán)綠色（左）
可見光燈箱觀察(凝膠底部打光),蛋白質(zhì)條帶反顯白色（右）